病理科醫用顯微鏡樣品制備問題解決方案：從固定到封片的質控要點

病理診斷的準確性和顯微鏡樣品制備質量密切相關。本文聚焦病理科常見制片問題，結合《臨床技術操作規范-病理學分冊》要求，提供系統化解決方案。

一、固定環節：避免組織自溶與抗原流失

問題表現：細胞核模糊、免疫組化染色失敗
解決方案：

固定液選擇

常規活檢：4%中性甲醛緩沖液（pH7.2-7.4）

免疫電鏡：2.5%戊二醛+2%多聚甲醛混合液

固定時間控制

小標本（<1cm3）：6-12小時

大標本：對半切開+真空負壓滲透（時間減半）

驗證方法

刀片切開組織：觀察切面是否呈乳白色

Trichrome染色：核質分界清晰為合格

二、切片質量：杜絕厚薄不均與刀痕

問題表現：切片皺褶、厚度超標（>4μm）
解決方案：

設備維護

磨刀角度：保持20-22°（用角度規檢測）

防卷板清潔：每次切片后用乙醇擦拭

操作規范

蠟塊修整：保留組織周圍1.5cm石蠟

切片速度：勻速轉動轉輪（2-3圈/秒）

特殊組織處理

脂肪組織：冷凍切片（-20℃預冷刀架）

骨組織：脫鈣后真空滲透（避免碎裂）

三、染色問題：優化對比度和特異性

問題表現：核漿對比差、背景著色深
解決方案：

H&E染色

蘇木素染色：初染3分鐘→分化至粉紅色→返藍5分鐘

伊紅染色：0.5%伊紅Y水溶液浸泡1-3秒

特殊染色

Masson三色：酸性復紅需**控時（30秒）

PAS染色：氧化劑濃度梯度預實驗

質控指標

核質比：1:3-1:5為Z佳

切片厚度變異系數＜10

四、脫水與透明：防止氣泡和脆裂

問題表現：封片后產生氣泡、切片碎裂
解決方案：

梯度脫水

酒精梯度：70%→80%→95%→****（每級5分鐘）

叔丁醇替代：用于線粒體保護

透明驗證

二甲苯浸泡后，用濾紙測試無濕潤痕跡

封片技巧

中性樹膠預熱至40℃（降低黏度）

蓋玻片傾斜45°緩慢放下

五、污染控制：杜絕微生物滋生

問題表現：切片出現絮狀沉淀物
解決方案：

預防措施

固定液添加0.01%疊氮化鈉

切片刀用75%酒精擦拭消毒

應急處理

污染切片：重新脫水至70%酒精后浸泡于1%氫氧化鈉24小時

嚴重污染樣本：廢棄處理并消毒器械

病理制片是**診斷的基礎，需建立標準化操作流程（SOP），關鍵步驟設置質量控制點。建議每月進行制片優良率統計，定期參加CAP認證培訓。掌握這些核心技能，您將顯著提升病理診斷的準確性和可靠性。